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Azure助力假病毒研究

新发和再发传染病对公共卫生造成了严重影响。然而,由于这些病原体例如新冠COVID-19,SARS必须在3或4级别生物安全实验室中进行处理,因此抗病毒药或疫苗的研发常常受到阻碍。人们一直在积极寻求解决这一问题的替代方法,其中使用假病毒代替野生型病毒,是一种很好的手段。

假病毒是一种重组病毒颗粒,其核心/骨架和包膜蛋白来源于不同的病毒。假病毒内部的基因通常被改变或修饰,使得它们不能自行产生表面蛋白。假病毒能够感染易感细胞,但是它们仅在感染的宿主细胞中复制1轮。与野生型(WT)病毒相比,假病毒可以在2级的生物安全处理级别的实验室进行处理,更易于操作。假病毒被广泛用于细胞病毒感染机制,受体识别研究,以及疫苗开发和评估中和抗体等。

由于假病毒通常经过工程改造以携带报告基因,因此对这些病毒进行定量分析比对WT病毒容易得多。在研究假病毒时通常使用qPCR检测构建的假病毒的病毒滴度,使用Western blot鉴定假病毒是否表达等。

例如由北京大学健康科学中心微生物与传染病中心,在《Plos One》发表的《Development and Evaluation of a Pseudovirus-Luciferase Assay for Rapid and Quantitative Detection of Neutralizing Antibodies against Enterovirus 71》的文章中使用qPCR的方法对构建的假病毒滴度进行检测,qPCR方法可以更加准确地测定病毒滴度和病毒感染效率。更精准的定量可以选择Naica微滴芯片数字PCR系统。

由军事医学科学院军事兽医研究所和河南科技学院动物科学与兽医学院在《JVS》上发表的《Packaging of Rift Valley fever virus pseudoviruses and establishment of a neutralization assay method》的文章中,使用Western blot方法对构建的假病毒进行鉴定,实验显示两个特异性条带,分子量约为65 kDa和56 kDa,分别与RVFV G1和G2蛋白的大小一致。阴性对照组未见特异性条带。这些结果表明,目的蛋白的表达是正确的。western blot检测结果均表明所得到的RVFV假病毒含有RVFV G1和G2蛋白,证实了假病毒的成功构建。



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参考文献:

1. Yuetao Li,Yongkun Zhao etc. Packaging of Rift Valley fever virus pseudoviruses and establishment of a neutralization assay method. J Vet Sci2018, 19(2), 200-206 https://doi.org/10.4142/jvs.2018.19.2.200

2. Qianqian Li etc. Current status on the development of pseudoviruses for enveloped viruses. Rev Med Virol.2017;e1963.

https://doi.org/10.1002/rmv.1963

3. Eva Chand etc .evelopment of a Moloney Murine LeukemiaVirus–Based Pseudotype Anti-HIV Assay Suitable for Accurate and RapidEvaluation of HIV Entry Inhibitors. Journal of Biomolecular Screening 11(6);2006DOI: 10.1177/1087057106288881